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天麻有性繁殖新技术

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一 什么是天麻的有性繁殖?
天麻有性繁殖,是用天麻种子进行繁殖的方法,在有性繁殖中需要种子萌发菌和蜜环菌。

二 为什么要进行天麻的有性繁殖?
天麻通过有性繁殖,可以进行品种改良,培育新品种,培育种栽,扩大种源,提高产量。更重要的是,无性繁殖数代以后,品种退化,繁殖系数逐年降低,产量逐年减少。通过有性繁殖可以防止种质退化。

三 什么是天麻种子的萌发过程?
天麻种子在特定条件下,胚吸水膨胀,播后15天胚体形天麻种子萌发过程变化越来越大,种胚逐渐达到与种皮等宽,胚体积继续增大,种皮被胀大呈枣核形,胚柄端颜色加深,靠近胚顶端种皮出现裂口:原球茎突破种皮而萌发(图18)


三 什么是天麻种子的萌发菌?萌发菌在天麻种子发芽中有什么作用?
天麻种子极小,无胚乳和其他营养,自身不能萌发。据研究发现天麻种子胚萌动初期所要求的菌不是蜜环菌,而是别的真菌。徐锦堂先生经过多年研究从天麻的原球茎中分离出种子萌发菌。所谓的萌发菌就是伴播天麻种子后,供给天麻种子发芽的营养,具有促使种子萌发的能力的菌类。目前,已分离到的天麻种子萌发菌有SGF-8104(紫萁小菇)、SGF-8102、SGF-8103、京陕807-05、兰小菇、石斛小菇等。生产上大量推广应用的有SGF-8103、紫萁小菇、石斛小菇等。天麻种子萌发菌在种子萌发阶段侵染种子,供给天麻种子萌发的营养,与其建立了一种共生关系,萌发菌是种子萌发的外源营养源。

四 如何分离与纯化天麻种子萌发菌
(1)群体混合分离将天麻种子萌发的原球茎用自来水冲洗干净,然后用无菌水冲洗数次,置于灭过菌的小培养皿中,原球茎用0.1%HgCl溶液浸泡消毒1~2分钟,用灭菌小剪刀剪成2~3段,在金霉素液中蘸一下,即可接入PD)A平面培养基中,置于25℃恒温箱内培养,3~10天即可发出菌丝
(2)单体分离将天麻种子接不同萌发菌株后,再分别从不同的原球茎中分离菌株的方法。常用的分离培养基为PDA加富培养基或麦麸培养基,经高压灭菌,在无菌条件下进行分离。当平面培养基上接种点处刚产
生白色菌丝时、立即用接种铲选择其中生长势旺盛而白色菌丝的部分、尽量少带培养基,应挑取长出培养基表面的白色菌丝,移入PA斜面培养基试管中央,置25℃恒温培养,经几次提纯转按、荣种无杂,生长正常,即为纯化的母种。

五 如何防止天麻种子萌发菌菌种的退化,如何复壮?
天麻种子萌发菌退化现象的主要表现是:菌丝体生长缓慢,颜色变暗、侵染天麻种子的能力下降。过多的传代是引起退化的主要原因。因此,传代次数应控制在2~3次之间。在分离和筛选到该菌株时,应采取相应的菌种保藏方法,延缓菌种退化,延长优良菌株的利用率。已经产生退化的菌种则必须进行复壮,防止退化。菌种复壮时,除应改善培养基的营养条件外,最有效的方法是用退化的菌种进行天麻播种,当形成原球茎后,采用天麻种子萌发菌菌种分离方法进行重新分离,并进行优良性状的比较和筛选,方可更新退化菌株。

六 天麻种子萌发菌紫萁小菇有哪些生物学特性?
紫其小菇是天麻萌发菌中筛选出的优良菌株之一。
1.紫萁小菇的形态结构紫萁小菇子实体散生或丛生。菌盖直径0.15~0.5厘米,发育前期半球形、灰色,密布白色鱗片,后平展,中部微突、灰褐色、边缘不规则、白色、甚薄,柔软,无味无臭。菌褶白色、稀疏9~32片,离生、放射状排列不等长。菌柄长0.8~3.1厘米,中生直立,中空、圆柱形,上部白色,基部褐色,稀疏散布白色鳞片,基部着生在密布丛毛的圆盘基上。孢子无色、光滑、椭圆形,有微淀粉反应
2.生物学特性
(1)腐生紫萁小菇多腐生于林间落叶、桔枝及植物腐根上,对纤维素有强烈的分解能力。在适当的条件下,也可兼营寄生生活。兼有腐生和寄生两种习性。天麻种子成熟后,飞落在林间地面染菌的树叶上,紫萁小菇又可侵入具有生命力的天麻种子中,使种子共生萌发。
(2)好气 紫其小菇是好气真菌,在森林中主要分布在林间枯枝落叶层上及表层土壤中.
(3)发光紫萁小菇具发光菌性,在暗室培养常可看到微弱的荧光,但其光强度不及蜜环菌。
(4)温度在15~30℃温度范围内均能生长。22~25℃之间最为适宜。
(5)pH 适宜的ph15~5.5。

七 培养天麻种子萌发菌二级及三级菌种的培养基有哪些?
般培养天麻种子萌发菌一级菌种的培养基为麦麸培养基,二级菌种的培养基有:
(1)液体菌种麦麸50克,葡萄糖20克,磷酸二氢钾3克,硫酸镁1.5克,维生素B110毫克,加水至1000毫升。
(2)固体菌种阔叶树锯木屑78%,麦麸20%,蔗糖1%,石膏1%。含水量65%。
三级菌种培养基是由阔叶树叶、阔叶树锯木屑、麦麩、蔗糖及石膏组成的固体培养基。

八 如何培养天麻种子萌发菌的二级菌种?
(1)液体菌种的培养用500毫升或250毫升的三角瓶在摇床上培养,500毫升的三角瓶装培养液250毫升,250毫升的三角瓶装培养液120毫升,将装有培养液的三角瓶经高压灭菌,在无菌条件下接种,一般斜面试管可接8~10瓶。摇床转速为150次/分,温度22~25℃,培养5~7天即可使用。
(2)固体菌种 瓶装常采用广口瓶或玻璃罐头瓶,洗净后,将配好的培养料装人瓶内。装料时边装边压实,使料装至离瓶口2~3厘米处,压平,用特制的木棒在瓶口料中打5~6厘米左右深,直径1.5~1.8厘米的接种穴,用布将瓶口及瓶壁擦干净,再用塑料薄膜盖住瓶口,外覆一张牛皮纸,用线绳或橡皮筋扎
紧,即可放入高压灭菌锅内,灭菌压力1~1.5千克/厘米2,灭菌时间1.5小日时。常压灭菌8小时于左右。灭菌后,瓶晾到30℃左右便可接种。

袋装通常用塑料薄膜筒裁成培养袋。市场上销售的有低压聚乙烯薄膜、高压聚乙烯薄膜筒及聚丙烯薄膜三种。低压聚乙烯薄膜质地柔软,韧性强,不耐高压灭菌,经常压灭菌不变形、不破裂。高压聚乙烯薄膜韧性差,一般不用于菌种培养。聚丙烯薄膜耐高温性能好,能经受高压灭菌,但柔韧性差,易破裂。培养袋的大小规格,薄膜的厚度可根据需要而定。用袋料机或手工把料装入袋中,料要装紧装实,装好后要扎牢袋口。用干布将袋口及袋周围擦干,袋装料后需要在料袋正面打4~5个接种穴,穴口直径1.5~2厘米,深2~2.5厘米,然后用专用胶布贴封。也可以在灭菌后,接种前打接种穴。短袋装料用特制木棒在料装至袋的2/3时,从上至下打一个直径2厘米的通气孔,然后擦净袋子,套上塑料套环,塞上棉花塞,再包一层牛皮纸即可。根据装料薄膜不同,灭菌方式也有区别。低压聚乙烯栽培袋需采用常压灭菌,不宜用高压蒸汽锅灭菌;聚丙烯袋可用高压灭菌法灭菌经灭菌后的料袋,待料温降到对30℃左右,可以接种。接种后放到培养室,控制室温在22~25℃,空气相对湿度55%~65%。培养阶段要求黑暗条件。同时,注意通风换气,防治杂菌污染。一般培养35~45天即可使用。


九 如何培养天麻种子萌发菌的树叶菌种?
树叶菌种的好坏是天麻进行有性繁殖成败的关键。树叶菌种的培育一般采用栓皮栎、麻栎、槲栎、板粟等阔叶树的叶子,在秋季落叶以后收集树叶,拣去杂质。在培菌装瓶(袋)时,提前浸泡,一般浸泡24小时后,捞出,控净水,加麦木屑等敷料。麦麩:木屑:树叶的体积比例是1:1:3,搅拌均匀,装瓶或塑料袋,洗净瓶口,盖上瓶盖,高压灭菌1.5小时,常压灭菌8~10小时。无菌条件下接菌。置22~25℃条件下,培养45天左右即可。

十 天麻有性繁殖需要准备哪些原料?
天麻种子、天麻种子萌发菌树叶菌种、树叶、蜜环菌菌种或菌棒、树棒等。

十一 如何选择箭麻?
种麻选择:选择顶芽饱满,个体新鲜、健壮、无伤、无病虫害、重量在100克以上的为最好,体大的营养充分,栽后箭麻生长旺盛,结果多。重量在100克以下的箭麻开花少,结果小。在种麻选择时特别要注意留种的箭麻一定要经历30~45天5℃左右的低温处理,若不经低温,箭麻不打破生理低温休眠,将不抽
薹,即使抽薹,开花也少,结果小。

十二 何时栽培箭麻?
早春温室育种,可以提早采种和播种,对种子提早发芽及早期接上蜜环菌都有很好的效果。因此,在有温室条件的地方可利用温室提前栽种箭麻,无温室条件的地方则应建造土温室。如果栽种少,可将箭麻栽在木箱内利用有保温的室内条件。

十三 如何栽培箭麻?
(1)箱栽为管理方便,最好将箭麻栽于木箱中。木箱的规格及填充料与箱栽天麻相同。栽法是,先将箱底放入15厘米厚的填充料,栽两行,每行摆放5~8个,上面盖填充料5~8厘米。只能栽一层。移栽时不必加菌棒。
(2)畦栽畦宽120厘米,两畦中间50厘米作业道,在畦上栽4行箭麻,箭麻平放花茎芽分别向两畦边,芽朝上,覆土5厘米左右(图19)。


十四如何对箭麻进行管理?

(1)插杆
春栽畦栽的箭麻,栽植当时已经插竹竿防倒,冬栽畦栽的箭麻,解冻后,应拔出原插小树枝标记,在原孔处插上根1.5米长竹竿,出苗后用细绳将花薹捆在竹竿上,防止大风吹倒花薹。
(2)遮阴天麻的花薹最怕直射阳光的照射。照射后会使受光面的茎秆变黑,下雨后倒伏。因此,凡在敞阳地栽植的箭麻,出苗前都应用树枝搭棚遮阴。棚的荫蔽度以能见到花花太阳为宜。若授粉期间正值雨季,在阴雨天授粉,一方面操作不方便,另一方面也降低结实率。故应在树枝荫棚上面先覆盖一层塑料薄膜,防止雨水.
(3)控温适宜的温度是20~25℃。当达到15℃时,顶芽便开始伸展,20~25℃生长最快。
(4)浇水天旱时应及时浇水,保持湿润。尤其是用塑料薄膜覆盖的棚,每周应浇一次水。麻层保持湿度50%为宜,空气湿度要求在70%~80%。
(5)病虫害防治常见的病害有:日灼、块茎腐烂病,常见的虫害有:蚜虫、伪叶甲等,其防治方法是用乐果、多菌灵等农药喷洒箭麻栽培基地及周围环境,做好防虫、防病工作。
(6)打尖天麻顶端几个花朵,结的果实很小,种子量少也不饱满,故应在现蕾后,将其顶部3~5个花蕾打掉,可减少养分消耗。这样,结的果实饱满,提高种子产量。
(7)授粉

十五 天麻如何人工授粉?
自然条件下,天麻主要靠小土蜂传粉,而自然界小土蜂较少,授粉率极低。因此,栽培箭麻必须进行人工授粉。一般在花开后次日上午10时左右进行,其方法是用左手轻轻捏住花筒,右手持小镊子或解剖针去除花的唇瓣,可见合蕊柱,用镊子或解剖针取下顶覆含有花粉的花药床(俗称药帽盖),轻轻放到蕊柱

中下部有黏盘的地方(雌蕊上)即可。或用竹签挑开“花帽”挑起粉块,粘在柱头上也可。进行人工授粉时要注意不能刺破子房。要掌握授粉的有利时机,要待花开后,当柱头分泌黏液时,花粉即成熟,是授粉的有利时机。授粉要在上午进行,下午花药干燥了,不易成功。花粉多在花开后的第二天上午9时至下午14时成熟,第二天上午9时进行授粉效果最好。天麻为无限花序,基部花与顶端花开放时间约差10~15天,在人工授粉时可分期进行了,随开花随进行。

十六 何时采收天麻种子?
授粉后15~20天左右,种子即可成熟,采收早了种子不成熟,晚了种子飞落了。恰好的时机是,将裂果期即果实表面颜色较暗,失去光泽,有明显凹陷的纵沟,但果实未开裂,手捏果实质软,剥开果皮种子易散落,种子呈浅黄色,即可采收。稍晚,种壳裂开,种子即飞落干净。下部的果先成熟,可以先采收保存,上部的随熟随采,每天进行检查,分期分批收获。

十八 如何保藏天麻种子?
天麻的种子比较特殊,种子很小,平均长0.69毫米,宽0.14毫米,不能长期保存,常温下(15~20℃)存放30天,种子活性全部丧失,不能发芽。因此,一般情况下,应随收随种或收后将果实用纸包好,存放到冰箱中(4~5℃)。实验证明:常温下存放7~10天,活力率为80%~90%;存放30天,活力为10%,低温保存可以延长保存期。4~5℃可保存一年,但是不能在0℃以下保存。种子带果壳一起保存较好,不要取出保存,取出后易干燥失去活性。

十九 何时播种天麻?
天麻种子的播期从4月至7月上每均可播种,播种规早越好,有利于种子萌发,延长生长发育时间。

二十 天麻有性繁殖的播种量是多少?
100克以上的箭麻,可结果80~120个果子,约110个能成熟,最少能有80个成熟果。每个果内有种子一般在1.9万~5.1万粒,最多可达7万粒,平均3万粒。一株大约可产种子240万粒,这其中约有80%的种子有胚,20%的种子无胚。一般穴的大小1米×0.6米×0.4米,每穴播种0.3~0.6克,20~30个果子即可。

二十一 如何进行天麻菌叶拌种?
将萌发菌从容器中掏出,取每穴需要量的萌发菌(一般1米×0.6米×0.4米穴需要750毫升瓶装萌发菌1.5瓶)尽量撕碎,将天麻果子(一般1米×0.6米×0.4米穴需要20~30个果子)撕开,撒在菌叶上,搅拌均匀,即可播种。

二十二 天麻有性繁殖的播种方法有哪些
(1)菌床接菌播种 播种时挖开菌床,取出菌棒,耙平穴底,先铺一薄层树叶,然后将拌好种子的菌叶分为两份,一份撒在底层,按原样摆好下层菌棒,棒间留3~4厘米的距离,盖土至棒平,再铺树叶后将另一份拌种菌叶撒播在上层,放蜜环菌棒后覆土厚10厘米左右,穴顶盖一层树叶保湿。

(2)菌枝伴菌播种利用蜜环菌菌枝伴萌发菌播种(图20)技术,与菌床接菌播种法基本相同,但不必预先培养菌材和菌床,完全用新鲜木段,播种时新挖播穴,铺树叶一层撒拌种菌叶后,摆新棒5~8根,两棒相距5~10厘米,将预先培养好的蜜环菌菌枝菌种由培养瓶中掏出,在两棒之间和棒头旁放5~6根
菌枝,每菌枝旁放少量拌好种子的菌叶,同法播上层。穴顶覆土10厘米,盖一层树叶。菌枝伴菌播种方法,蜜环菌纯、无杂菌菌生长旺盛,同时穴中完全用新鲜木段伴播,营养丰富,种子发芽的原球茎接菌快,接菌率高,天麻产量高,是目前较好的播种。
方法图20蜜环菌菌枝伴萌发菌菌种播种

(3)阳畦播种由温室培育的种子,播期在4~5月份,此期室外温度低,达不到种子发芽的最适宜温度,可采用塑料薄膜覆盖阳畦播种法。挖穴深40厘米,播种覆土3~5厘米,距地面还10厘米左深盖一薄层树叶,穴顶盖一层塑料布,可提高地温2~3℃,有利种子发芽和提高接蜜环菌的几率。播种法同菌床接菌播种或菌枝伴菌播种。播种后的温度应适宜,否则影响发芽。最适宜的地温是25℃,20℃以下或30℃以上均受抑制。湿度55%~65%为好。适宜的温度和湿度条件下15~20天即可发芽。
根据各地所处的纬度和海拔高度不同,天麻有性繁殖播种方法,与无性繁殖栽培方法一样,可以选用坑播、堆播和半坑播播种层次也可根据当地自然气候条件而相适应地变化。

二十三 天麻有性繁殖的关键技术有哪些?
衡量有性繁殖的效果,主要是看天麻的产量,产量的高低,关键不仅在于发芽多少,更重要的是在于有多少发芽的原球茎能与蜜坏菌建立了共生关系。
(1)提高发芽率天麻种子发芽率的高低,与种子的成熟度、收获后贮藏时间的长短和贮藏条件、接不同萌发菌株等有密切关系。只有发芽的原球茎多,接蜜环菌的几率才高。提高种子发芽率的几个关键问题是:
①要掌握好种子的适宜成熟度,随收随播。
②选择发芽率高的优良萌发菌株伴播天麻种子,才能保证有较高的发芽率。
③播种穴的树叶要湿润的叶子。当天用不完的树叶,应喷水淋湿保存。
④掌握好湿度,播种穴应常保持潮湿,播后1~2天,打开穴上面塑料布,观察播种层的树叶,如果树叶不干,保持湿润为合适。如果树叶干燥就应浇水。秋天雨水过多时,应盖好塑料布,并使四周排水通好,防止积水和水分过大。
⑤调节温度。天麻种子适宜的发芽温度是22~25℃。如温度低,应盖塑料薄膜提高地温。6、7月份播种时,气温较高,般不必采取保温措施。但如果播种后遇梅雨季节,温度低、湿度大,也应盖塑料薄膜。中午温度高时,临时再揭去。
(2)提高接菌率关键就在于能否接上蜜环菌。而接菌率的高低主要取决于原球茎及其分化的营繁茎的大小、蜜环菌的生长势。原球茎如果接不上蜜环菌,很快就会饥饿死亡,没有收益提高接菌率的关键是:
①菌床、菌棒质量要好。原球茎接菌率的高低取决于蜜环菌生长势的强弱,优良的蜜环菌株在菌材上有生长茂密、幼嫩的菌索,生活力旺盛,侵染原球茎及营繁茎的几率就高。因此,选择优良的蜜环菌株,培养出旺盛的菌枝和菌床,是提高原球茎接菌率的关键因素之一。
②发芽率要高。发芽率高就意味着原球茎数量多,这样接菌的几率才会高。
(3)适时播种和采收
①提早播种期。一般平原和低山区天麻在6月份播种,而高山区7月份甚至8月初播种,从播种到冬季低温到来天麻进入休眠期的时间愈长,天麻生长季也愈长,个体愈大。如果能采用温室育种,提前到4月份播种,种子发芽时间早,生长季长,同时接菌时间长,也可使更多的原球茎与蜜环菌建立营养关系,提早
播种不仅对当年白米麻单株平均产量有好处,同时对提高播种穴白米麻的数量也有很好的效果。因此,采用温室育种提早播种,是提高播种穴当年产量的重要措施。接菌率愈高,白麻长得愈大,单株平均产量愈高,当年穴产量也愈高。
②播种当年穴产量低,几乎没有箭麻。播种后一年半收获,穴的产量高,箭麻的数量增加,而且单位面积产量增加。总之,采用温室育种提早播种期,选择优良的萌发菌伴播天麻种子,菌材质量好,蜜环菌生长旺盛,能供给白麻、米麻和箭麻丰富的营养,可以保证天麻有性繁殖的成功,并获得优质高产。

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